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玉米赤霉烯酮免疫親和柱操作說明書
【概要】
玉米赤霉烯酮(Zearaleaone)又稱F-2毒素，是玉米赤霉菌的代謝產(chǎn)物，具有類雌激素樣作用，具有較強(qiáng)的生殖毒性和致畸作用，可引起動(dòng)物發(fā)生雌激素亢進(jìn)癥，導(dǎo)致動(dòng)物不孕或流產(chǎn)，對(duì)家禽、豬、牛和羊的影響較大，給畜牧業(yè)帶來很大的經(jīng)濟(jì)損失。
【適用范圍及性能】
用于定性、定量檢測(cè)谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的玉米赤霉烯酮時(shí)的樣品前處理。
柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
【試驗(yàn)原理】
本產(chǎn)品的測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，玉米赤霉烯酮單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的玉米赤霉烯酮經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過玉米赤霉烯酮免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)，玉米赤霉烯酮與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫玉米赤霉烯酮，然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。
【包裝組成】
根據(jù)不同規(guī)格，每一個(gè)盒中包含5-25支玉米赤霉烯酮免疫親和層析柱及1份說明書。
【需要而未提供的設(shè)備及試劑】
設(shè)備：
┅┅高速均質(zhì)器或組織勻漿機(jī)
┅┅粉碎機(jī)
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移液器：?jiǎn)蔚?100?l～1000?l
┅┅槽紋濾紙（折疊快速定性或定量濾紙）
┅┅玻璃微纖維濾紙（1.5?m孔徑）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等）
試劑：
┅┅甲醇（色譜級(jí)）
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液（PBS緩沖液）：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，最后用純水稀釋至1000mL
【試劑配制】
樣品提取液：配制甲醇-水（8：2）溶液作為樣品提取液
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及其制品和飼料
┅┅稱取50g粉碎的樣品于100mL容量瓶中，加入5.0g氯化鈉，以樣品提取液定容。
┅┅轉(zhuǎn)移至均質(zhì)杯中，在均質(zhì)器上高速攪拌，提取2分鐘；
┅┅4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾
┅┅取10mL濾液并加入40mLPBS緩沖液稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾后液體待測(cè)；
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/S的流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅以10.0mL的PBS溶液和去離子水依次淋洗柱子1次，流速約為1滴-2滴/S，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。
（二）啤酒，黃酒等酒類
┅┅取10mL試樣脫氣后與90mLPBS緩沖液混勻，用玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾后液體待測(cè)；
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/S的流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅以10.0mL的PBS溶液和去離子水依次淋洗柱子1次，流速約為1滴-2滴/S，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。
【結(jié)果判定】
經(jīng)免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計(jì)或者HPLC檢測(cè)，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。收集到的1ml洗脫液中的玉米赤霉烯酮含量相當(dāng)于1g樣品中玉米赤霉烯酮含量。
【注意事項(xiàng)】
┅┅玉米赤霉烯酮危害很大，應(yīng)戴手套操作。
┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：親和柱可于常溫保存，2-8℃儲(chǔ)存可延長(zhǎng)有效期，不可凍存
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。
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